«Sem crescimento» é um resultado conciso, mas o que está por trás dele? O Capítulo 71 da USP, relativo aos ensaios de esterilidade, analisa amostras selecionadas para detetar microrganismos recuperáveis em condições de cultura. A observação ganha significado quando o lote, o plano de amostragem e os controlos de recuperação são analisados em conjunto. Um resultado satisfatório fornece evidência sobre o exame; não prova que todas as unidades do lote sejam estéreis.

A ciência torna-se mais fácil de compreender quando o relatório é encarado como o ponto final de uma cadeia de decisões: quais as unidades a examinar, como isolar os microrganismos, como controlar o ensaio e como interpretar os resultados obtidos.

Dar aos microrganismos a oportunidade de serem detetados

A Farmacopeia dos Estados Unidos publica o Capítulo Geral 71, «Testes de Esterilidade». Este identifica um ensaio previsto na farmacopeia, sendo que o capítulo atual aplicável e o procedimento laboratorial regem o trabalho propriamente dito. Uma referência a um método não constitui uma aprovação concedida a um fornecedor.

Os ensaios de cultura convencionais permitem que os microrganismos viáveis cresçam em meios de cultura específicos. Existem duas abordagens principais para submeter a amostra a esse exame. Na filtração por membrana, os microrganismos potenciais são retidos numa membrana e avaliados através de cultura. Na inoculação direta, o material é introduzido nos meios de cultura. O material e o procedimento validado determinam a abordagem adequada.

Bugno e colegas utilizaram testes convencionais de filtração por membrana como referência num estudo sobre um sistema de deteção automatizado. O seu método convencional incluía dois meios de cultura e um período de observação de 14 dias. Esta descrição refere-se ao exame avaliado e não constitui um procedimento a seguir, tal como apresentado num artigo publicado na Internet. Comparação do desempenho dos testes de esterilidade.

Por que razão o material pode influenciar um resultado negativo

Mesmo um procedimento bem estabelecido tem de ser aplicado à amostra real. Se uma formulação inibir o crescimento microbiano, uma observação negativa pode refletir essa inibição, em vez da ausência de contaminação. O Capítulo 1227 da USP explica por que razão os métodos da farmacopeia exigem a comprovação da recuperação do organismo de teste na presença do produto. USP sobre a validação da recuperação microbiana.

Trata-se da adequação do método: a relação entre um ensaio e o material que este analisa. Um resultado positivo com uma formulação diferente não estabelece essa relação para esta amostra. A composição, o conservante e a concentração devem ser tidos em conta na discussão, pois ajudam a definir o que o método analisa.

O ambiente de análise é importante também do ponto de vista oposto. A contaminação introduzida durante a análise pode dar origem a um crescimento que não teve origem na amostra enviada. As orientações da FDA abordam o desempenho dos meios de cultura e os controlos laboratoriais para garantir uma interpretação fiável. Os controlos de recuperação, os meios de cultura que favorecem o crescimento e um ambiente controlado abordam, cada um, um possível erro diferente. A FDA sobre os controlos laboratoriais.

A amostra não pode servir de referência para todas as unidades

Um ensaio por lote analisa normalmente uma seleção de unidades. Essa seleção deve refletir o processo e os seus riscos. O Anexo 1 da Comissão Europeia considera os ensaios de esterilidade dos produtos acabados como parte integrante de um sistema de controlo mais abrangente, com amostras representativas que incluem as partes do lote que apresentam maior risco. Anexo 1, secções 10.5–10.6.

A razão é tanto estatística como microbiológica. Uma amostra de pequena dimensão pode não detetar a contaminação, mesmo que um método detete todas as unidades contaminadas com que se depara. O cálculo que se segue torna essa limitação visível, sem definir um plano de amostragem.

Interpretar o «ausência de crescimento» como um resultado analítico

O resultado indica que não foi detetado crescimento nas amostras analisadas nas condições descritas, sendo que a amostragem e os controlos válidos corroboram essa interpretação. As orientações da FDA relativas aos recipientes e fechos referem que os ensaios de cultura apenas permitem a deteção de microrganismos capazes de crescer nas condições de ensaio. Os ensaios são destrutivos, pelo que a mesma unidade analisada não pode ser novamente testada no seu estado original. A FDA sobre as limitações dos ensaios de esterilidade.

Esse resultado diz respeito aos microrganismos recuperáveis. Deixa outras questões analíticas a cargo dos respetivos métodos: atividade das endotoxinas, impurezas químicas e integridade da embalagem ao longo do tempo. A análise conjunta de resultados complementares proporciona uma visão mais completa, sem transformar um único teste numa garantia geral de qualidade.

O que acontece quando se observa crescimento?

Um resultado positivo na cultura requer investigação. A FDA adverte contra a possibilidade de o descartar como contaminação laboratorial sem provas conclusivas e documentadas. Repetir um exame até se obter um resultado satisfatório não explica a observação inicial. O resultado, qualquer desvio e a investigação devem constar do registo. A FDA sobre a investigação de resultados positivos de esterilidade.

Os métodos rápidos levantam uma questão de interpretação relacionada. No estudo de Bugno, o sistema automatizado detetou os organismos testados mais cedo. Essa comparação corrobora as condições investigadas; um relatório que utilize outro método necessita de um procedimento próprio identificado e de provas relevantes da sua adequação.

Os detalhes que tornam um relatório de fácil leitura

A linha de resultados é mais fácil de compreender quando o registo que a rodeia indica o lote submetido, a descrição da amostra, o número de unidades examinadas, o método e as datas dos exames. Os controlos e os desvios explicam se a observação corrobora a conclusão apresentada. Esses detalhes permitem ao leitor acompanhar as provas, em vez de se limitar a aceitar uma afirmação de passagem.

O Capítulo 71 da USP é, por isso, mais útil quando integrado num relatório analítico documentado. O ensaio responde a uma questão microbiológica específica, enquanto o contexto da amostragem e da recuperação explica o alcance e os limites dessa resposta.