”Ingen tillväxt” är ett kortfattat resultat, men vad ligger bakom det? Sterilitetstestningen enligt kapitel 71 i USP undersöker utvalda prover med avseende på mikroorganismer som kan isoleras under odlingsförhållanden. Observationen blir meningsfull när man betraktar satsen, provtagningsplanen och kontrollerna av isoleringsresultaten i sitt sammanhang. Ett godkänt resultat utgör bevis för undersökningen; det bevisar inte att varje enhet i satsen är steril.

Det är lättare att följa den vetenskapliga resonemanget när rapporten betraktas som slutledet i en kedja av beslut: vilka enheter som ska undersökas, hur mikroorganismerna ska isoleras, hur försöket ska kontrolleras och hur resultaten ska tolkas.

Att ge mikroorganismerna en möjlighet att upptäckas

United States Pharmacopeia publicerar det allmänna kapitlet 71, Sterilitetstester. Där anges en prövning enligt farmakopén, där det gällande kapitlet och laboratorieproceduren styr det faktiska arbetet. En metodreferens är inte ett godkännande som beviljas en leverantör.

Vid konventionell odlingsanalys ges livsdugliga mikroorganismer möjlighet att växa i specificerade odlingsmedier. Det finns två huvudsakliga metoder för att införa provet i analysen. Vid membranfiltrering fastnar eventuella mikroorganismer på ett membran och analyseras sedan genom odling. Vid direkt inokulation införs materialet direkt i odlingsmediet. Valet av lämplig metod avgörs av provmaterialet och det validerade förfarandet.

Bugno och kollegor använde konventionella membranfiltreringstester som jämförelse i en studie av ett automatiserat detektionssystem. Deras konventionella metod omfattade två odlingsmedier och en observationsperiod på 14 dagar. Detta beskriver den utvärderade undersökningen snarare än att tillhandahålla en procedur att följa från en webbartikel. Jämförelse av prestanda vid sterilitetsprovning.

Varför materialet kan påverka resultatet negativt

Även ett väletablerat förfarande måste fortfarande tillämpas på det faktiska provet. Om en formulering hämmar mikrobiell tillväxt kan ett negativt resultat spegla denna hämning snarare än frånvaro av kontaminering. I USP kapitel 1227 förklaras varför metoder enligt farmakopén kräver bevis på återvinning av testorganismer i närvaro av produkten. USP om validering av mikrobiell återvinning.

Detta är metodens lämplighet: sambandet mellan en analysmetod och det material som analyseras. Ett godkänt resultat med en annan sammansättning innebär inte att detta samband gäller för just detta prov. Sammansättning, konserveringsmedel och koncentration bör tas upp i diskussionen, eftersom de bidrar till att definiera vad metoden mäter.

Testmiljön spelar roll även ur motsatt perspektiv. Kontaminering som uppstår under undersökningen kan leda till tillväxt som inte härrör från det inlämnade provet. I FDA:s riktlinjer behandlas odlingsmediets prestanda och laboratoriekontroller för att säkerställa en tillförlitlig tolkning. Återvinningskontroller, tillväxtfrämjande odlingsmedier och en kontrollerad miljö hanterar var och en olika möjliga felkällor. FDA om laboratoriekontroller.

Urvalet kan inte representera varje enhet

Vid ett partiprov undersöks normalt ett urval av enheter. Urvalet måste återspegla processen och dess risker. I Europeiska kommissionens bilaga 1 betraktas sterilitetsprovning av färdiga produkter som en del av ett mer omfattande kontrollsystem, där representativa prover ska omfatta de delar av partiet som medför större risk. Bilaga 1, avsnitt 10.5–10.6.

Anledningen är både statistisk och mikrobiologisk. Ett litet urval kan missa kontaminering även om en metod upptäcker varje kontaminerad enhet den stöter på. Följande beräkning tydliggör denna begränsning utan att föreskriva någon provtagningsplan.

Att tolka ”ingen tillväxt” som ett analytiskt resultat

Resultatet innebär att ingen tillväxt kunde konstateras i de undersökta proverna under de angivna förhållandena, vilket stöds av giltiga provtagnings- och kontrollrutiner. I FDA:s riktlinjer för behållare och förslutningar påpekas att odlingsprov endast påvisar mikroorganismer som kan växa under testförhållandena. Testningen är destruktiv, vilket innebär att samma undersökta enhet inte kan testas på nytt i sitt ursprungliga skick. FDA om begränsningar vid sterilitetsprovning.

Det resultatet avser mikroorganismer som kan isoleras. Andra analytiska frågor behandlas med hjälp av sina egna metoder: endotoxinaktivitet, kemiska föroreningar och förpackningens integritet över tid. Genom att tolka kompletterande resultat tillsammans får man en mer fullständig bild utan att ett enskilt test blir en allmän kvalitetsgaranti.

Vad händer när man observerar tillväxt?

Ett positivt odlingsresultat kräver utredning. FDA varnar för att avfärda det som laboratoriekontaminering utan slutgiltiga, dokumenterade bevis. Att upprepa en undersökning tills ett tillfredsställande resultat uppnås förklarar inte den ursprungliga observationen. Resultatet, eventuella avvikelser och utredningen ska dokumenteras. FDA om utredning av positiva sterilitetsresultat.

Snabba metoder ger upphov till en relaterad tolkningsfråga. I Bugno-studien upptäckte det automatiserade systemet de testade organismerna tidigare. Den jämförelsen stöder de undersökta förhållandena; en rapport som bygger på en annan metod måste innehålla ett eget specificerat förfarande och relevant bevisning för lämplighet.

De detaljer som gör en rapport lättläst

Resultatraden blir lättare att förstå när den omgivande posten anger namnet på den inlämnade satsen, provbeskrivningen, antalet undersökta enheter, metoden och undersökningsdatumen. Kontroller och avvikelser förklarar om observationen stöder den angivna slutsatsen. Dessa detaljer gör det möjligt för läsaren att följa bevisförloppet istället för att bara ta något på orden.

USP kapitel 71 är därför särskilt användbart som en del av en dokumenterad analysredogörelse. Analysen ger svar på en specifik mikrobiologisk fråga, medan sammanhanget kring provtagning och isolering förklarar svaret styrka och begränsningar.